① 引物：優(yōu)化引物設計。

② 退火溫度：設置退火溫度梯度，找到合適的退火溫度。 

③ 引物濃度：適當提高引物濃度。 

④ 延伸時間：適當增加延伸時間至10 - 15 sec/kb。

⑤ 循環(huán)數(shù)：增加循環(huán)數(shù)至36 - 40個循環(huán)。

⑥ 模板純度：使用高純度模板。 

⑦ 模板使用量：使用量參照反應體系推薦量調整并適當增加。

① 引物：優(yōu)化引物設計。 

② 退火溫度：嘗試提高退火溫度并設置退火溫度梯度。 

③ 引物濃度：適當降低引物濃度。 

④ 循環(huán)數(shù)：減少循環(huán)數(shù)至25 - 30個循環(huán)。 

⑤ 反應程序：使用兩步法或Touch down PCR程序。 

⑥ 模板純度：使用高純度模板。 

⑦ 模板使用量：使用量參照反應體系推薦量調整并適當減少。